不想挑晶體？原位晶體篩選，測試和結構解析方法

  X射線晶體衍射儀經歷了快速發展的10年，我們的光源越來越強，探測器越來越快，數據處理越來越智能。儀器的進步，大大提高了我們的晶體數據收集的效率和成功率，讓我們有更多的時間研究更深入的問題。然而好的晶體永遠都是一位的尤其對于蛋白質晶體來說，獲得能夠衍射的晶體，仍然是主要的瓶頸之一。通常，為了檢驗蛋白質晶體的衍射質量，我們需要從晶體板上挑出晶體，加上防凍劑，冷凍，放到衍射儀上，然后測試。然而所有這些步驟都有可能損壞晶體。低溫晶體篩選不僅耗時耗力，而且我們沒有辦法避免這些操作過程對晶體衍射質量的影響。

 

  幾年前，在同步輻射出現了原位晶體學的方法：快速，方便，可以直接在晶體生長環境下研究晶體的衍射。原位的方法避免了低溫晶體學在晶體轉移過程中對晶體的損害。同樣在室內衍射儀上，Bruker D8 VENTURE-ISX STAGE同樣完美地實現了原位晶體篩選評估：

 

  1.切換方便，5分鐘內即可完成樣品臺的安裝和拆卸

  2.軟件控制，只需要鼠標點擊即可快速對整個晶體板的每個結晶空進行查看

  3.自動多樣品隊列衍射實驗

  4.快速表征晶胞參數，識別晶體以及后續的數據收集

 

 ▲ ISX Stage mounted on D8 VENTURE

 

實驗案例：GlucoseIsomerases晶體篩選和測試

 

儀器配置：D8VENTURE IµS 3.0，PHOTONII，ISX STAGE

樣品：GlucoseIsomerases結晶初篩48孔板，96個drop

總時間：1h（查看96個drop：30min；衍射28個晶體：30min；晶胞表征：10min）

 

1

晶體查看，挑選

 

 

 ▲ ISX Stage Software Control

 

2

確定晶體篩選隊列

 

 ▲ 挑選用于自動篩選的晶體

 

3

自動隊列晶體衍射實驗

 

 

 ▲ 30min，6個孔，28個晶體樣品篩選結果

 

4

數據收集

 

室溫下，原位對4顆晶體進行數據收集，然后合并數據，使用MR解析結構。

 

 

 ▲ 原位常溫數據采集和結構解析